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細胞傳代培養操作步驟
  • 發布日期:2021-12-09      瀏覽次數:1584
    • 原理 : 

       細胞在培養瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養)。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。   

      操作步驟 :

       1、將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。  

       2、加入0.5—1ml 0.25%溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。  

       3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將棄去,加入10ml培養液終止消化。   觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發白并出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。   

      4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養液塞好橡皮塞,置37℃下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。   

      附:消化液配制方法:   稱取0.25克蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。

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