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ELISA實驗試劑準備的關鍵點
  • 發布日期:2025-05-14      瀏覽次數:109
    • 進行ELISA實驗時,試劑的準備是至關重要的,它直接影響實驗結果的準確性和可靠性。以下是一些關于ELISA試劑準備的關鍵點:


      試劑盒檢查:

      1. 確認試劑盒的有效期:確保所使用的ELISA試劑盒在有效期內,因為過期的試劑可能會導致實驗結果不可靠。

      2. 核對組分是否齊全:檢查試劑盒內所有組分是否齊全,包括標準品、樣本稀釋液、酶標記抗體、底物溶液、終止液等。


      試劑準備:

      1. 回溫:實驗前,將所需試劑在室溫平衡2030分鐘,以確保其溫度與室溫一致,避免因溫度差異導致的試劑濃度變化。注意,HRP標記檢測抗體濃縮液不需要平衡室溫,即用即取。<cite>6</cite>

      2. 洗滌液的準備:如果洗滌液有晶體析出,需在37℃加熱至晶體全溶解。按照1:20的稀釋倍數進行稀釋,如取30mL濃縮洗滌液(20×),加入570mL超純水或去離子水,得到洗滌液(1×)。

      3. HRP標記檢測抗體的稀釋:開蓋前瞬時離心,按1:100的比例進行稀釋,根據實驗所需總量配制。例如,10μL HRP標記檢測抗體濃縮液(100×)加990μL抗體稀釋液進行配制,輕輕混勻。

      4. 待檢測樣本的準備:不同的樣本應使用相應的樣本稀釋液進行稀釋。如果樣本檢測值超過標準曲線的最高范圍,可將樣本進行一定的稀釋,使樣本的檢測值處于標準曲線范圍內。具體稀釋倍數需自行優化,參考對應說明書。

      5. 梯度稀釋的標準品:根據說明書操作,不同靶點、不同樣本類型可能需要不同的稀釋方案。

       

      注意事項:

      1. 避免高溫解凍:切勿使用高溫解凍試劑,可提前1小時從20℃轉移至4℃,再室溫靜置。

      2. 底物溶液的準備:TMB使用液由TMB10mg/5ml無水乙醇)0.5ml、底物緩沖液(pH5.510ml0.75% H2O2 32μl組成;ABTS使用液由ABTS 0.5mg、底物緩沖液(pH5.51ml3% H2O2 2μl組成。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

      3. 標準品的處理:如果標準品需要稀釋,應嚴格按照說明書進行,以確保標準曲線的準確性。

      通過以上步驟,可以確保ELISA實驗中的試劑處于最佳狀態,從而提高實驗的準確性和重復性。


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