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ELISA實驗中OD值偏低探討
  • 發布日期:2024-05-13      瀏覽次數:320
    •   OD全稱optical density,也就是光密度,也可以稱為吸光度。吸光度指的是利用物質有的吸收光譜,來鑒別物質或者測定物質的含量,也就是將一束特定波長的光通過被檢測物,被檢測物可以將光吸收掉一部分,通過吸光度計算被檢測物的濃度。一般被檢測物濃度越高,吸光度的值就會越高。實驗中也是利用“OD值”和被檢測物的濃度之間的關系來根據吸光度。
       
        OD值是用酶標儀測定的,其范圍一般在0-3之間,也有高于3.0的,其值的大小跟孔中顏色的深淺成比例,一般顏色深,OD值就比較高,另外ELISA所測定的OD值反應的結果一般是一定稀釋度的抗體效價,如果你所用的抗體稀釋度很小,效價很高的話,其OD值是會很高的。
       
        實驗中OD值偏低情況分析:
       
        第一種情況,整體的OD值偏低
       
        可能情況分析:
       
        1. 標準問題,標準濃度有沒有提高的潛力,標準曲線的擬合方式等
       
        2. 顯色試劑問題,顯色試劑是否新鮮,是否污染
       
        3. 檢測抗體,檢測抗體效價是否OK,保存方法是否合適,稀釋液中不含有蛋白質,基質中有影響酶活的物質等
       
        4. 體系中是否有其他影響抗原抗體結合的物質
       
        5. 孵育條件是否正確
       
        6. 洗滌不能過猛,洗滌過猛也可能會造成顯色偏低
       
        第二種情況,標準曲線OK,樣本的OD值很低
       
        情況概述:操作步驟全按照要求,樣本信息也適用,樣本類型血清,標曲OK,但就是樣本的OD值很低,不在曲線范圍內。
       
        可能情況分析:
       
        1. 一般標曲OK,試劑盒基本沒有質量問題,這個時候先去分析樣品和保存方法的原因。
       
        2. 樣品是否新鮮,小愛之前看到很多論壇大咖建議用新鮮樣品檢測,將標準品稀釋后加入血清或血漿中檢測(也就是血清進一步稀釋標準品),觀察檢測結果,判斷是否是血清中有未知物質影響。
       
        3. 血清中成分復雜,標準蛋白的稀釋液成分簡單,血清中可能有450nm顯色物質與板底非特異結合,或者有些非特異結合抗體的蛋白,不能洗干凈,所以本底比標準樣品稀釋液高。
       
        4. 適當延長顯色時間。
       
        5. 更換酶標儀,排除儀器原因。
       
        6. 聯系我們,嘗試其他方法。
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