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大鼠細胞培養操作步驟
  • 發布日期:2022-12-12      瀏覽次數:658
    • 大鼠細胞培養操作步驟:

      1、細胞傳代:

      細胞密度達到80-90%時即可傳代
      ①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗-2次;
      ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
      ③-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
      ④將細胞懸液000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
      ⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
      ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
      2、細胞復蘇:
      ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間min左右,加入4-5ml培養基混勻。
      ②在000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
      3、細胞凍存:

      待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
      ①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗-2次,加入mL 0.25%(T25瓶)
      ②-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;
      ③將細胞懸液000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加ml凍存液重懸細胞;
      ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。


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