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細(xì)胞凍存主要操作步驟
  • 發(fā)布日期:2022-04-13      瀏覽次數(shù):1174
    • 1、選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,在凍存前一天*換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉,用0.25% yi 蛋白酶消化。適時(shí)去掉yi蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。

      2、去上清液,加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為3×106~1×107/mL之間。

      3、將上述細(xì)胞分裝于安瓿或冷凍塑料管中,安瓿裝1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要*封閉,圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。

      4、將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時(shí),再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時(shí)(此步可省略),再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí),蕞后沉入液氮中。

      細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,*取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。


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